该技术于2009年取得实用新型专利,证书号:200910113566.4。
1.特点特性:本发明提供一种用于卵周系内注射慢病毒生产转基因羊的方法。
2.技术要点:方法本发明提供一种用于卵周隙内注射慢病毒生产转基因羊的方法,将慢病毒载体与病毒包装质粒共转染为293T细胞,至48小时后离心,得慢病毒的浓缩液,将其注射于成熟24-25小时的卵母细胞卵周隙内,与精子结合实施体外受精,12小时后置于培养液中培养,48小时后统计卵裂率和转基因率。其一取卵母细胞用体外成熟液洗涤3-4次,按25-30枚/滴入体积75-78μl/滴的体外成熟培养液,在5%CO2、95%下培养;其二体外成熟的卵母细胞脱去卵丘细胞,慢病毒注射入细胞卵周隙内,用体外受精液洗涤2-4次,按25-30枚/滴入受精液内;解冻精液,移入受精液,离心弃上清液,沉淀精子加受精液滴,孵育;取受精12-18小时的卵,按上步处理后入四孔培养板内培养即可;其三为药剂慢病毒液、抽卵液、成熟液、显微操作液、SOF、受精液、培养液、养血清的必备。
3.推广前景:一种用于卵周系内注射慢病毒生产转基因羊的方法,在胚胎生物技术实验工作中具有重要意义和应用前景。
4.适宜地区:进行相关研究的科研院所、高校等。