该技术于2010年取得实用新型专利,证书号:Zl200910113567.9。
1.特点特性:本发明提供的一种用于绵羊卵母细胞体外的筛选培养方法。
2.技术要点:方法其一取宰杀半小时内的卵巢,置入温度30-40℃,含青霉素和链霉素的生理盐水中,3小时内清洗3-4次,捡出卵母细胞;用25-30μmol/L的亮甲酚蓝,置于35-39℃水浴中染色85-92分钟,细胞质呈蓝色,用体外成熟液洗涤3-4遍,按25-30枚/滴放入55-78μl/滴的体外成熟培养液中,在5%CO2、95%的条件下培养;其二将体外成熟25-28小时的卵母细胞脱去卵丘细胞;体外受精液洗涤2-4遍,按25-30枚/滴的入50-70μl的受精液滴内;解冻精液,移入受精液,离心4-5分钟弃去上清液,将沉淀的精子,按2-4×106个/ml的密度加入受精液滴,孵育;将受精12-18小时的卵取出,按上步方法处理移入四孔培养板内培养即可。其三所用试剂吸卵液、亮甲酚蓝成熟液、染色液SOF、受精液、培养液、羊血清的必备。
3.推广前景:一种用于胚胎绵羊卵母细胞体外的筛选培养方法,在胚胎生物技术实验工作中具有重要意义和应用前景。
4.适宜地区:进行相关研究的科研院所、高校等。